利用BaculoDirect昆虫杆状病毒表达系统表达重组旋毛虫副肌球蛋白(recombinant Trichinella spiralis paramyosin, rTsPmy),以获得生物学活性较好的重组蛋白。通过PCR和DNA重组方法构建含TsPmy基因的Gateway入门载体重组质粒pDONR221(pDONR221/TsPmy),经测序鉴定后,扩增重组质粒;利用重组质粒pDONR221/TsPmy和BaculoDirect线性杆状病毒进行Gateway DNA重组反应,构建重组病毒,用其直接感染昆虫细胞Sf9使得重组病毒具有感染活力;连续感染Sf9以扩增病毒,利用滴度较高的病毒感染Sf9进行rTsPmy表达;SDS-PAGE及Western blotting分析鉴定表达的重组蛋白rTsPmy。结果显示,重组质粒经测序鉴定显示序列正确;SDS-PAGE及Western blotting显示rTsPmy分子量大小约110 kDa,未见不完全表达;可溶性分析显示rTsPmy部分可溶,大部分为不可溶沉淀;Western blotting结果显示rTsPmy可被旋毛虫感染的小鼠和猪抗血清识别,具有抗原特异性。本研究首次利用BaculoDirect昆虫杆状病毒表达系统成功表达了rTsPmy,获得翻译后修饰更加完善、纯化效果更好的重组蛋白,对于进一步研究TsPmy的功能,为制备有效的旋毛虫病疫苗候选抗原分子提供了生物学基础。

探讨坤泰洗剂体外抗阴道毛滴虫的作用。体外培养阴道毛滴虫,选择坤泰洗剂进行体外抗阴道毛滴虫实验,坤泰洗液浓度经倍比稀释分别为1∶1、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16,同时以甲硝唑、洁尔阴洗液为阳性对照,RPMI-1640为阴性对照。实验表明坤泰洗剂在 24 h时杀死阴道毛滴虫的最低稀释倍数为1∶8,其杀虫效果与甲硝唑无统计学差异;但对阴道毛滴虫的抑制作用强于洁尔阴洗液,可见坤泰洗剂在体外具有显著的抑制阴道毛滴虫的作用。

为掌握云南贡山地区野生小型兽类的种类和主要细菌性病原体的携带情况,于2014—2015年在该地区诱捕野生小型兽类,进行种类鉴定,解剖取肺、脾等组织。采用巢式PCR对无形体Anaplasmataceae、恙虫病东方体Orientia tsutsugamushi、斑点热群立克次体(Spotted fever group rickettsiae,SFGR)以及莱姆病螺旋体Lyme disease spirochete等4类病原体进行检测。结果共捕获小兽759只,涉及14属35种,优势属为姬鼠属(29.1%)和绒鼠属(17.4%)。对其中541份标本进行无形体PCR检测,结果显示:12份新埃立克体(Candidatus Neoehrlichia mikurensis)阳性,来自姬鼠、绒鼠、鼩鼱和白腹鼠;2份沃尔巴克氏体Wolbachia阳性,来源于鼩鼱和灰腹鼠;3份巴尔通体Bartonella阳性,来源于绒鼠和大足鼠。采用56 kDa基因片段引物对恙虫病东方体进行检测,发现4份阳性标本。其中2份与Boryong 血清型菌株同源性最高,均为97.0%;1份与Karp血清型同源性最高,为86.0%;另一份与Kato-related血清型同源性最高,为86.0%,系统发生树显示,其与Kato-related位于同一分支。提示这两份标本可能是恙虫病东方体Karp血清型和Kato-related血清型菌株的变异株。

AaCPR100A是本实验室从埃及伊蚊RNAseq数据库中获得的预测与表皮结构相关的基因。本文拟通过生物信息学和分子生物学技术,探究埃及伊蚊表皮AaCPR100A基因的序列特点,并分析其在埃及伊蚊的时空表达特征。埃及伊蚊表皮AaCPR100A蛋白序列AaCPR100A ORF长度为765 bp,编码254个氨基酸,蛋白分子量约为28.6 kDa,1～16位氨基酸残基为信号肽,其氨基酸序列中含有表皮蛋白CPR家族中的RR-1基序。埃及伊蚊与白纹伊蚊、致倦库蚊、冈比亚按蚊和黑腹果蝇的氨基酸同源性分别为95%、72%、61%、54%。qRT-PCR结果显示AaCPR00A基因在表皮和卵期表达量最高,并随发育阶段呈现显著递减变化。结果表明,埃及伊蚊AaCPR100A表达具有时空和组织特异性特征。

本文旨在建立检测登革1型和2型病毒的一步法实时荧光定量PCR方法,为登革热的诊断和预测提供技术支撑。依据登革1型和2型病毒的保守区序列设计引物和探针,建立了同时检测两个血清型登革病毒的一步法实时荧光定量PCR方法。特异性实验结果显示,该方法可检测出登1型和2型病毒,与登革3型、4型病毒、黄热病毒、流感H3N2病毒均无交叉反应,具有较好的特异性。对登革1型和登革2型的灵敏度均为10²copies/μL。应用该方法,可检测出登革1型和2型病毒混合感染C6/36后不同时间点病毒复制动态。在两个血清型登革病毒混合感染C6/36细胞72～120 h登革2型病毒的拷贝数与单独感染时登革2型病毒的拷贝数相比显著下降。上述研究证实建立的一步法实时荧光定量PCR方法具有特异性好灵敏度高、重复性好等特点,能够用于登革型和2型病毒混合感染样本的检测。

以COⅠ、16S rDNA和ITS基因为标记,选用环斑库蠓Culicoides circumscriptus(N267)作为外群,对海峡两岸10个群体77个荒川库蠓标本的遗传距离、基因分化、系统发育和种群结构进行分析。基于COⅠ、16S rDNA基因数据集及ITS基因数据集的AMOVA分析均显示,大的遗传变异主要来自种群内的遗传变异,在线粒体数据集及核糖体数据集的比例分别为96.75%和91.44%。不同基因的分子数据显示,不同种群间的荒川库蠓遗传分化程度低、基因交流频繁,各个地理种群没有按照地理区划形成独特的遗传结构。气流及人为因素可能是造成其远距离扩散的主要原因。

为了更快速、准确地鉴别库蠓近似种以及弥补传统形态学在种类鉴定中存在的操作繁琐、难度大等不足,本文采用DNA测序的方法获得库蠓亚属的刺螫库蠓Culicoides punctatus、灰黑库蠓C. pulicaris和新替库蠓C. newsteadi等3种库蠓近似种的部分线粒体COⅠ基因序列,并对其进行分子鉴定;基于Kimura 2-parameter模型分析遗传距离,同时应用MEGA 6.0软件构建系统发育树。结果显示,序列经过Clustal W比对及人工校对后,上述3种库蠓的COⅠ序列长度为394 bp;遗传距离在种内和种间具显著差异(P﹤0.05);系统发育树中不同库蠓种类各自构成单系(群),同种类不同地理种群聚为一支。本研究初步证实了线粒体COⅠ序列可应用于库蠓近似种的分子鉴定。

记述采自海南文昌清澜港的尖吻魟Telatrygon zugei鼻腔的长旋分盘虫Merizocotyle macrostrobus Chisholm & Whittington, 2012和广东汕尾的何氏鳐Okamejei hollandi泄殖腔的澳洲小杯虫Calicotyle australis Johnston, 1934。所获标本与原始描述基本一致,仅个别量度略有差异:长旋分盘虫的中央大钩比原始描述长;澳洲小杯虫的雄性交接器较原始描述短。小杯虫亚科为中国新记录亚科,长旋分盘虫与澳洲小杯虫为我国新记录种,尖吻魟与何氏鳐分别为二者的宿主新记录。

记述细蚤科Leptopsyllidae Baker, 1905,双蚤属Amphipsylla Wagner, 1909的1新种及1新亚种,即拟原双蚤, 新种Amphipsylla paraprimaris Bai, Lu et Zhang, sp. nov. 和缺棘双蚤六盘山亚种, 新亚种Amphipsylla desispina liupanshanensis Bai, Lu et Wei, ssp. nov.,模式标本采自宁夏六盘山自然保护区,均保存于军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所医学昆虫标本馆。

血吸虫病是一种严重危害人畜健康的寄生虫病。传统的血吸虫病诊断技术主要包括病原学检查,免疫学检查和影像学检查3个方面。近年来随着新型生物材料、分子生物学和生物传感器等新技术的发展,也给血吸虫病的检测和诊断技术带来了新的方法。

昆虫抗菌肽是生物防御体系的重要组成部分,具有一定的抗肿瘤效果,在细胞选择性、理化性质的稳定性及耐药性方面具有明显优势。本文从昆虫抗菌肽的分类、活性检验、作用机制等方面对昆虫抗菌肽的研究现状进行了综述,并讨论了利用基因工程技术制备抗菌肽并用于肿瘤治疗的前景。