为建立基于纳米抗体的检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析技术,将已经通过噬菌体文库筛选得到的两株纳米抗体的质粒,在枯草芽孢杆菌中表达,得到具有活性的抗体蛋白(VHH-48、VHH-52)并以NI-NTA亲合层析纯化。以柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,标记VHH-48和VHH-52抗体蛋白并制备金标垫,分别用日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和羊抗鼠IgG作为检测线和质控线,确定抗体蛋白的最佳标记pH和最适蛋白浓度。采用抗体双夹心的方法对两株抗体蛋白进行组合,建立胶体金免疫层析方法。以优化的双夹心抗体组合,组装试纸条,进行了灵敏度的测定和血吸虫病人粪检阳性血清的敏感性评估,以并殖吸虫等其他寄生虫感染的血清测定了试纸条的特异性。结果显示,成功表达并获得了纯度较高的纳米抗体。胶体金标记VHH-48和VHH-52抗体的最适蛋白量为14和 10 μg/mL,最适pH分别需要加入16和12 μL体积的0.2 mol/L K₂CO₃,并确定以VHH-52标金和VHH52划线为最佳的抗体双夹心组合。对可溶性虫卵抗原的最低检测量为3.4 ng/mL,检测血吸虫病人阳性血清的检出率为2.27%,检测其他寄生虫感染血清结果显示出良好的特异性。本文构建了基于日本血吸虫SEA纳米抗体的胶体金免疫层析试纸条方法,为纳米抗体在血吸虫病快速诊断的应用奠定了一定基础。

本研究通过使用逆转录酶,将基孔肯雅热病毒RNA首先逆转录为cDNA。选取基孔肯雅热病毒保守序列设计引物及探针,建立基孔肯雅热病毒重组酶介导一步法等温核酸扩增RT-RAA(Reverse transcription recombinase aided amplification,RT-RAA)快速检测法,并分析其灵敏度及特异性。结果显示,该方法整个过程在39 ℃进行,检测时间短(＜20 min),检测下限可达100 copy,并与黄热病毒、日本乙型脑炎病毒、西尼罗病毒、登革病毒I型等蚊媒病毒不存在交叉反应。本文建立的基孔肯雅热病毒RT-RAA检测法,灵敏度高、特异性强、操作简便,适应于口岸基层基孔肯雅热病毒的快速检测。

为研究登革病毒与蚊虫相互作用的分子机制,本研究对DENV-2的E蛋白基因进行了毕赤酵母分泌表达。首先,经RT-PCR方法克隆DENV-2的E蛋白基因,将克隆的基因与表达载体pPICZaB连接以构建表达重组子;并经酶切、PCR、测序筛选实验鉴定正确重组子。然后,重组子经氯化锂法转化毕赤酵母菌KM71H获得转化子;经抗生素、表型鉴定、PCR筛选得到Muts型的多拷贝转化子。最后,经甲醇诱导基因表达,Western-blotting方法鉴定蛋白表达情况及最佳表达时间。本研究对DENV-2的E蛋白成功进行了分泌表达,并且确定其表达最佳发酵时间为96 h;为进一步研究登革病毒与蚊虫相互作用的分子机制奠定了基础。

利用描述流行病学、圆形分布法和SaT Scan 9.4软件探讨北京市2006—2016年输入性登革热病例时间和空间分布特征,并利用Arcgis软件展示病例现住址空间分布情况,总结北京市登革热病例流行病学特征。2006—2016年北京市累计报告输入性登革热病例131例,圆形分布显示:发病高峰的平均角ā为233.968°,流行期为4月28日至12月23日,发病高峰对应日期为8月25日。病例现住址具有空间聚集性,聚集区域是一个半径为10.20 km,中心位置为39.98 N, 116.41 E的圆形区域中。 北京登革热病例主要从东南亚、南亚输入,病例输入时间上具有聚集性,感染地点和病例现住址分布上有空间聚集性,病例职业主要为干部职员、学生、家务、待业人员和商业服务人员,结果提示应针对高危人群开展传染病防控和诊疗。

埃及伊蚊serpin23(丝氨酸蛋白抑制剂23)在雌蚊唾液腺特异高表达,是蚊虫唾液组分的主要蛋白之一。本文设计特异性引物序列,采用RT-PCR技术扩增获得埃及伊蚊广东电白株serpin23成熟肽序列,构建重组表达质粒pET-28a(+)-serpin23并测序验证。经IPTG诱导表达、KCl染色、切胶纯化获取了目的蛋白;制备了小鼠特异性抗serpin23蛋白多克隆抗体。结果显示:获得serpin23成熟肽序列,全长1 197 bp,编码399个氨基酸。等电点pI为6.13,具有serpin结构域和一个功能未知的FAINT结构域。pET-28a(+)-serpin23重组质粒可表达了大小约为47 kDa、以包涵体表达为主的融合蛋白。Western Blot结果证明serpin23重组蛋白可以与抗-His标签和抗-serpin23抗体发生免疫反应,约47 kDa处产生特异性条带。本研究成功获得了埃及伊蚊广东电白株serpin23重组表达蛋白和抗serpin23多克隆抗体,为后续功能研究奠定基础。

记述采自中国南海鱼类的4种鳞盘虫科单殖吸虫,分别是寄生于姬鮨Tosana niwae鳃的眶棘鲈似杯盘虫Calydiscoides scolopsidis Lim, 2003,寄生于裸颊鲷Lethrinus spp.鳃的澳洲似杯盘虫Calydiscoides australis Young, 1969、棱纹似杯盘虫Calydiscoides duplicostatus (Yamaguti, 1953) Young, 1969与复杂似杯盘虫Calydiscoides difficilis (Yamaguti, 1953) Young, 1969。其中,眶棘鲈似杯盘虫的交接器长管状,支持器末端扩大呈斧状,阴道片状,底部连接一弯管;澳洲似杯盘虫交接器由背腹两块骨片构成,腹片末端分叉,背片具薄膜,阴道球状且中部具不规则褶皱;棱纹似杯盘虫交接管基部分叉,支持器Y形,右支长度约为左支的1/3,末端连接一几丁质管;复杂似杯盘虫交接器由两块大几丁质片构成,阴道由杯状部与块状部构成。所获标本与原始描述基本一致。眶棘鲈似杯盘虫、澳洲似杯盘虫、棱纹似杯盘虫与复杂似杯盘虫均为我国新记录种。

抗菌肽是机体抵抗外来病原入侵而产生的一类具有生物活性的多肽物质,是机体先天性免疫系统的重要组成部分,具有广谱的抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗寄生虫以及抗肿瘤的生物学活性。原虫为单细胞真核生物,致病性原虫对人类健康和畜牧业生产造成了严重危害。研究证实抗菌肽可抑制原虫的生长发育甚至杀死原虫。 本文对抗原虫作用的抗菌肽种类、作用机制与应用前景等方面进行综述,为研制新型广谱抗原虫病药物提供理论基础。

当前,登革病毒及其媒介伊蚊已遍布全球热带和亚热带地区。气候变暖、全球化、国际旅行、人居环境改变和病毒变异等,是导致登革热不断扩张的主要因素。现在,登革热已经遍布全球六大世界卫生组织区域,超过125个国家成为登革热地方性流行疫区。迄今为止,全球每年登革热的发病率估计波动在0.5~2亿之间,制图法评估发病率则接近4亿。目前尚无疫苗预防或特异性抗病毒药对治登革热,快速病例检测和临床治疗能够降低重症病例死亡率,而媒介蚊虫控制是现今预防和控制登革热流行的主要手段。为防控输入性登革热传入内陆口岸,总体防控措施为:一是对前往登革热疫区的出境人员及提供准确的登革热疫情评估通告,特别是针对重点人群,即劳务输出人员和出境留学人员,开展登革热防护的健康教育,降低个人感染风险;二是建立完善的疫情预警监测机制,及时做好出入境人员及货物等携带媒介生物的检验检疫,将输入性登革热的传播风险降到最低。

蚊媒病是严重的公共卫生问题,遗传控制策略用于蚊虫的控制,它具有种特异性、环境友好、创新性等特点,本文对遗传控制策略的目标、分类及实际应用进展等进行了概述。