谭伟龙, 董言德, 王忠灿, 李春晓, 汪中明, 赵彤言
本研究的目的是采用荧光定量PCR扩增技术,建立快速检测淡色库蛟Culex pipiem pallet钠离子通道L1014位点击倒抗性(Knockdown resistance,kdr)相关点突变方法,该方法的原理是以突变位点为3’端设计两条特异性上游引物,和一条非特异下游引物组成两对引物平行双管法,用荧光定最PCR扩增快速检 测淡色库蚊钠通道LI0I4F突变的SS, SR, RR3种基因型。用此方法对48个北京淡色库蚊样本进行基因 分型,42个样本检测结果与等位基因特异性PCR (AS-PCR)检测结果完全一致,得到SS (TTA/TTA)基 因型21个,占50.0%, SR (TTA/TTT)基因型16个,占38. 1%, RR (TTT/TTT)基因型5个,占 11-9%,与测序结果完全一致;另外6个样本检测结果与AS-PCR检测结果不一致,测序显示:TCA (LI014S)、TTC (L1014F)突变各1株,另4株为敏感纯合子。因此,PCR SYBR GREEN扩增灵敏度 (93.75%)低于AS-PCR法(100%),但特异性较高,达100%;分析原因可能是被检测样本引物结合部 位多态性较高,影响了引物的结合,而AS-PCR凭经验能完成部分结果的判断。综上所述,用PCR SYBR GREEN扩增技术快速检测淡色库蚊的L10I4F基因突变仍是一种值得采纳的等位基因分型方法。