Ras超家族是由一群具有保守氨基酸基序的GTP结合蛋白组成,作为双向分子开关对细胞的多种功能具有调节重要的作用。本文报告分离得到一个新的阴道毛滴虫Ras cDNA克隆,命名为TvRasC。TvRasC cDNA编码一个194氨基酸的蛋白,与其它Ras亚家族成员蛋白序列的一致性在46%到52%之间。序列分析表明,该蛋白序列拥有Ras亚家族保守的结合GTP结构域。进化树分析发现该基因与人类的Rit基因位于同一亚群。由于Rit家族成员不含有CAAX异戊烯化基序,而TvRasC在羧基末端有一个典型的CAAX异戊烯化基序,因此TvRasC不属于Rit家族成员。在TvRasC的效应结构域内,与位于HRas第33位的天冬氨酸对应的氨基酸残基是天冬酰胺,有研究表明这种变化将大大削弱Ras 基因家族与下游效应分子Raf的结合能力。因此我们预测TvRasC可能只有低水平的GTP酶活性,这种替换有可能使Raf失去与Ras结合域相互作用,并可能导致有活性有丝分裂蛋白激酶没有刺激效应。有关TvRasC在寄生性阴道毛滴虫原虫中的作用有待进一步研究。

将编号为01,02,03,04,05的5个伊氏锥虫克隆群体以10⁷条/只的剂量经耳静脉分别接种至1只新西兰大白兔体内,免疫荧光试验检测抗体滴度达到最高后,开始耳静脉采血提取抗血清。之后每隔2天提取一次抗血清,每只共提取10次,5只共50份血清等量(各占1/50)混合,称为抗活体锥虫血清“抗体库B”;此外取BeTat 1.1,BeTat 1.2……BeTat 1.19,BeTat 1.20共计20个抗原变异体以10⁷条/只的剂量经耳静脉分别接种至1只新西兰大白兔体内,免疫荧光试验检测抗体滴度达到最高后,一次心脏采血,分离血清,20只共20份血清等量(各占1/20)混合,称为抗活体锥虫血清“抗体库A”;取编号为01的伊氏锥虫克隆群体以100条/只的剂量腹腔注射分别接种小鼠和大鼠,镜检见虫后使用抗活体锥虫血清“抗体库B”和抗活体锥虫血清“抗体库A”分别进行治疗。结果显示“抗体库B”治疗组的小鼠保护率为93.75%,大鼠的保护率达到了100%,“抗体库A”的治疗效果则不明显。

本文应用血清学方法PVC-Dot-ELISA,便携式B型超声诊断仪和X线对青海南部高原女性人群的包虫病的感染情况作了调查。结果显示流行区女性人群包虫病抗体血清学阳性率达16.85%(294/1 745)(PVC-Dot-ELISA),患病率达9.97%(174/1 745)(影像学)。提示青南高原地区女性人群是包虫病的高风险人群之一,应重视牧区女性人群包虫病的防治工作。

为明确西尼罗病毒(WNV)与乙型脑炎病毒(JEV)的免疫交叉反应,本文分别用WNV全抗原与JE减毒活疫苗免疫小鼠,采用间接免疫荧光试验检测血清中2种病毒IgG抗体水平及其交叉反应情况。结果表明:WNV组在第4次免疫后的14天和35天出现2个高峰,平均效价分别为6 088和4 305;JEV组第4次免疫后,小鼠血清JEV抗体呈现缓慢上升的趋势。无论是在WNV全抗原免疫小鼠血清中还是在JE减毒活疫苗免疫小鼠血清中,同一血清对WNV抗原和JEV抗原均有反应,且抗体效价差异有显著性。在抗WNV抗体阳性血清中,两者交叉反应相对较强,在抗JEV抗体阳性血清中,两者交叉反应较弱。WNV与JEV存在一定交叉反应,但是否有交叉保护作用则需要中和试验等进一步证实。

根据已发表的西尼罗病毒Chin-01株基因序列,参照文献资料选择合成一对引物,建立西尼罗病毒的RT-PCR检测方法,对反应条件进行了系列优化后,应用于感染蚊虫样本及来亨鸡血液样本中的病毒核酸检测。该方法的检测敏感性达到1.0PFU,感染蚊虫样本和来亨鸡血液样本均能够扩增出与预期值大小一致的特异性区带,经序列测定证明,与实验感染所用病毒株序列完全相同。可见RT-PCR是检测实验感染蚊虫和来亨鸡体内西尼罗病毒行之有效的方法。

为了分析诱蚊诱卵器不同布放时间和空间对现场诱捕白纹伊蚊的影响,建立灵敏、高效、易行的登革热传播媒介现场监测方法。将诱蚊诱卵器按野外监测方法布放,并分别在布放的第2、3、4和7天检查诱蚊诱卵阳性数;同时分别布放在同一垂直面的不同高度0m、1.0m和1.5m处,在布放的第4天检查诱蚊诱卵阳性数。诱蚊诱卵器布放后第2、3、4、7天的诱蚊诱卵阳性指数分别为23.4、38.5、50.3和72.8,捕蚊总数和捕获活蚊数也随布放时间延长而增加,但活蚊比率却逐渐减少;诱蚊诱卵器布放在地面和同一垂直高度1m或1.5m的诱蚊诱卵阳性指数分别为19.30,9.26和4.63。诱蚊诱卵器现场布放时间以4天为佳,布放空间最佳位置是放在树荫、花盆、绿化带花草林木下的地面上。

采用RT-PCR技术从美洲大蠊中扩增出变应原Cr-pII基因,并将其克隆至pMD18-T载体中。经序列测定和分析证实,所克隆的片段含有长度为1 185 bp的完整开放阅读框(ORF),与台湾株来源的Cr-pII(Per a 1.0103)有95.9%的同源性。用Nde Ⅰ和Not Ⅰ将目的片段从T载体中切下,定向亚克隆入表达载体pET24a(+),然后成功转化大肠杆菌菌株BL21 Star。经IPTG诱导得到45kDa的重组蛋白,Western-blot分析表明其具有良好的IgE结合活性。并通过生物信息学方法获得了目的蛋白的抗原表位和3D结构模型。

用3′-Race和5′- Race 技术获得了德国小蠊咽侧体抑制肽Allatostatin(AST)的cDNA全长,共有1 560bp,包括1 125bp的开放阅读框。起始密码子ATG位于第125位,终止密码子TAA位于1 249位,其后为310bp的非编码序列;开放阅读框共编码375个氨基酸,这些氨基酸在水解蛋白酶的作用下可转录翻译出13个AST的前体蛋白,它们分别由6～18个氨基酸组成,在C末端均具有相同的Y/F-X-F-G-L氨基酸特征序列。

光学显微镜观察结果显示:驯鹿狂蝇蛆1龄幼虫大小为(2.45±0.03)mm×(0.74±0.01)mm,淡黄白色,纺锤形;背面有棘刺雏形;各体节腹面有密集的棘刺多列;其中以最后一列和各节的侧方有较长的缨毛状棘刺为特征。2龄幼虫大小为(11.32±0.08)mm×(6.10±0.05)mm,两端稍窄呈圆筒状;背腹面各节皆环绕有棘刺6～8列,棘长色深。成熟的3龄幼虫呈棕黄色,大小为(33.20±0.006)mm×(10.22±0.03)mm;背腹面各节皆环绕有棘刺,特别是5～9体节棘刺密集而大,尤以背侧明显;第4～8体节背面中央前缘有一梭形棘刺区域;各体节腹面两侧棘刺稍大;在各节腹面后缘两侧分别有一稍大的棘刺丛区域,其中的棘长而锐。概括起来,虫体各部位的棘刺可分为几种类型:一是圆丘锥状棘刺,其基座呈圆丘形,顶端为直的锥状;二是扁平锥状棘刺,棘底较宽,棘刺较直;三是鹰钩状棘刺,棘刺末端钩状弯曲。成蝇体大,形似野蜂,长14～16mm;触角沟中部有一明显的隆突;腹部有黄黑色绒毛;翅以稍狭窄开放的2R₅室和稍长的向后下折曲的m₂脉为特征。

本文首次报道澳门蠓科昆虫的采集记录,2005年11月30日在澳门采获7种蠓科昆虫皆为澳门特区新纪录,其中包括2个新种:圆额毛蠓新种Dasyhelea gongylophoda Yu sp.nov.和林玲毛蠓新种D.linlingae^* Yu sp.nov.。

对杀虫剂产生抗药性日益成为媒介蚊虫防治中心突出问题,有机磷和氨基甲酸酯是害虫防治中主要使用的杀虫剂类型。本文主要针对蚊虫对有机磷和氨基甲酸酯抗性相关羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶基因的研究进展进行了阐述。

记述8种当前用于害虫抗药性检测的分子生物学方法:专一性等位基因PCR扩增;PCR-单链构象多态性;固相微测序反应;限制性片段长度多态性;PCR-寡核苷酸探针斑点杂交;随机扩增多态性DNA;Northern 斑点杂交;固定化人工膜-高效液相色谱。评述各种检测技术基本原理、在害虫抗性检测中的优缺点及应用范围。