热卡限制能使众多实验动物的寿命延长,而且它是唯一延缓哺乳动物衰老的途径。我们用原生动物阴道毛滴虫建立了热卡限制模型。在此研究体系中,该原生动物细胞周期在热卡限制的培养条件下较糖充足的培养条件下延长80%。本研究运用抑制性消减杂交的方法,以期筛选在两种培养条件下差异表达的基因,并从2个cDNA消减杂交文库中分离到15个克隆。经序列分析表明,有9个未知基因,6个已知基因。

通过流行病学调查分离到奶牛隐孢子虫虫株,经实验室鉴定为牛安氏隐孢子虫(Cryptosporidiumandersoni),经蔗糖漂浮法收集和蔗糖密度梯度离心、滤器滤过、多次低速离心提纯后,通过冻融和超声波处理的全卵囊抗原免疫Balb/c小鼠4次,取阳性小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。经间接ELISA方法筛选,有限稀释法3~4次克隆,获得5株分泌抗牛安氏隐孢子虫(C.andersoni)单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1A3,3B10,3F4,4B3,4F11)。5株单抗的染色体数目平均在96~98条之间,上清效价分别在1∶100和1∶12800之间,腹水效价分别在1∶12800和1∶204800之间。采用免疫荧光法对各株的单抗腹水进行初步鉴定,发现其中4株为抗卵囊壁单抗,1株为抗子孢子单抗。对其中3株单抗的腹水提纯后进行SDS-PAGE电泳分析,其重链分子量约为52·7kDa,轻链分子量约为24kDa。

用PCR方法扩增抗隐孢子虫子孢子ScFv片段,插入表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28-ScFv,然后,将绿脓杆菌外毒素(PE40)片段定向克隆到ScFv基因的下游,构建免疫毒素表达质粒pET28ScFv-PE40。经酶切分析、PCR检测和测序进行鉴定。成功地构建了免疫毒素表达质粒pET28ScFv-PE40。将上述质粒转化受体菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,成功地表达了目的蛋白。免疫毒素ScFv-PE40大小约为66kDa,表达量约占菌体蛋白总量的14%。

利用Trizol一步法从柔嫩艾美耳球虫孢子化10h卵囊提取总RNA。利用poly(A)QuikmRNAIsolationkit分离纯化了mRNA。采用cDNASynthesisKit合成cDNA,以XR-λZAP为载体,构建了cDNA表达文库,经蓝白斑筛选,其重组率为98%,滴度为0·9×106pfu/mL,扩增后滴度为1×109pfu/mL。随机取10个克隆,提取λDNA后,经PCR鉴定,插入片段长度大于0·4Kb。该cDNA表达文库的构建为下一步功能基因的筛选等奠定了良好基础。

采用Western-blot免疫学方法对嗜人按蚊中肠粗蛋白和膜蛋白(即纯化后的粗蛋白)分子量及免疫原性进行分析。结果,经SDS-PAGE电泳,嗜人按蚊中肠粗蛋白显示8条主带,分子量范围在(66200~15850Da);而膜蛋白显示4条主带,分子量范围在(66200~35480Da)。利用中肠粗蛋白免疫小鼠所获得的抗血清,可特异性识别粗蛋白中的3个条带;而特异性识别膜蛋白的仅1条,分子量为38·9kDa。可见,利用蔗糖不连续梯度离心可获得膜蛋白,该蛋白含有与抗蚊中肠粗蛋白抗体相结合的膜蛋白表面抗原,这对今后制备嗜人按蚊中肠单克隆抗体具有参考价值。

在室内研究了3种菊酯类药剂对蚊虫的熏倒、灭杀效果。结果表明:当富右旋反式丙烯菊酯浓度为600mg/mL时驱避效果最佳,对志愿者的有效保护时间为7·5h。药剂浓度为200mg/mL时以右旋丙炔菊酯的击倒、灭杀效果最佳,在16h后分别达到了33·3%、20%,当浓度为400mg/mL、600mg/mL时以富右旋反式丙烯菊酯的效果最佳,16h后对蚊虫的击倒、灭杀效果分别达到50%、23·3%和60%、33·3%。混配药剂中,以富右旋反式丙烯菊酯、右旋丙炔菊酯组合剂量均为300mg/mL时最佳,其对志愿者的有效保护时间为6·5h。16h后对蚊虫的击倒和灭杀效果达到了60%和40%。

美洲大蠊(Periplanetaamericana)具有典型的不连续气体交换循环(DGC)呼吸模式,一个DGC分为气门关闭颤动(CF)和气门开放(O)两个阶段。不同的个体,DGC、CF和O阶段历时差异很大,随着DGC历时增加,CF阶段历时增加速率大于O阶段,O阶段CO2释放量随DGC、O阶段历时增加而增加,单位体重的CO2平均释放速率随DGC历时增加而减少,但与O阶段历时关系不显著。体重影响O阶段CO2释放量和平均释放速率,而与DGC、CF和O阶段历时关系不显著。DGC、CF和O阶段历时随温度增加而减少,DGC频率和单位体重的CO2平均释放速率随温度增加而增加,但O阶段CO2释放量在一定温度内是相对恒定的,表明CO2平均释放速率主要是DGC频率调制而不是O阶段CO2释放量调制的。

为利用蛋白纯化技术获得较高纯度美洲大蠊天然主要变应原,以进一步提高临床诊断的特异性和免疫治疗疗效。美洲大蠊全虫粗浸液通过DE-52离子交换层析、HiprepSephacrylS-200凝胶过滤层析等分离步骤得到了纯度为90%的目的蛋白,回收率为26%,经WesternBlotting分析74kDa的蛋白质具有免疫原性,为变应原疫苗的纯化和标准化奠定了基础。

柱蠓是一类捕食性蠓类,常见于水网地带。其幼虫属水生型或半水生型,江河湖沼及其近岸边都可作为幼虫孳生地,稻田、石穴积水以及潮湿树穴等也可有其幼虫孳生。雌性成虫捕软体小虫为食,尤其是弱小的摇蚊。世界已知柱蠓约有330种,广布于世界各地,以热带地区为多,但以往越南河内尚未见报导。本文报导了1966年采自越南河内的4只柱蠓,经分类研究确认是一新种———光彩柱蠓StilobezzianitelaYu,sp.nov.(图1~9),这是越南河内首次报导柱蠓。模式标本收藏于北京,军事医学科学院医学昆虫标本馆。

本文主要报道采自云南的虻科4新种,分别命名为学忠虻Tabanusxuezhongisp.nov.,中平虻Tabanuszhongpingisp.nov.,副异额虻Tabanusparadiversifronssp.nov.和勐定麻虻Haematopotamengdingensissp.nov.。模式标本保存在军事医学科学院微生物流行病研究所医学昆虫标本馆。

记述采自新疆维吾尔自治区阿勒泰地区蚋属绳蚋亚属Simulium(Gomphostilbia)一新种,即阿勒泰绳蚋Simulium(Gomphostilbia)altayensesp. nov.,仅对雌虫形态进行了描述并与其近缘种比较作分类讨论。

圆孢球虫病(Cyclosporiasis)是一种新发现的、经食物或水传播的人体寄生虫病,主要症状为胃肠炎和迁延性腹泻。本文对此种原虫的病原学、流行病学、临床表现、实验室诊断及治疗方面的研究进展进行了综述。

一氧化氮(NO)在宿主抗疟原虫感染的免疫应答过程中发挥重要作用。通过CO8+T细胞、NK细胞的介导,NO可有效地控制红外期疟原虫的感染。在抗红内期疟原虫感染的免疫应答中,由于感染宿主的免疫状态、感染虫株的差异性以及疟原虫的发育阶段和NO产生部位不同等多种因素的影响,NO生物学作用的发挥存在一定差异。当疟原虫进入蚊发育阶段,NO则能够有效地阻断配子体的感染力及杀灭动合子。

蝇密度监测是制定预防控制以蝇为媒介的传染性疾病策略、考核防制效果以及评价一个地区环境状况的依据。因此建立一种或多种具有可比性、可操作性、科学的监测方法十分重要。常用的蝇类监测方法有笼诱法、目测法、格栅法等。在笼诱法测定中,诱饵对家蝇、大头金蝇、丝光绿蝇3种城市主要蝇种的引诱作用及可比性极为重要。糖醋饵对家蝇的引诱力要优于腐鱼,对大头金蝇、丝光绿蝇也有较好的引诱力,且具有可比性。在添加与醋等量的水之后,可以将糖醋饵的引诱力提高一倍。