目的 :研究雄性激素对鼠巨噬细胞株 (ana 1)细胞杜氏利什曼原虫感染率及感染水平的影响。方法 :体外培养巨噬细胞 ,实验组用雄激素 (0 4μmol L)处理 2 4h ,按巨噬细胞和前鞭毛体 1∶10的比例感染杜氏利什曼原虫。Giemsa染色法观察不同时限 (感染初期 ,3h ,6h ,12h ,2 4h ,36h ,48h)的感染率及感染水平。结果 :雄性激素处理的巨噬细胞对杜氏利什曼原虫感染率及感染水平明显高于未加雄性激素的对照组 ,并且随着时间的延长这种差别愈趋明显 (感染后 12h ,2 4h ,P <0 0 5 ;36h ,48h ,P <0 0 1)。结论 :雄性激素增强杜氏利什曼原虫对巨噬细胞株细胞感染率及感染水平。

哺乳动物的唾传锥虫 (Salivaria ,又译涎传锥虫 )是人类非洲锥虫病和家畜锥虫病的病原 ,在医学和兽医学上占有重要地位。按现行分类方法 ,它含 4个亚属 ,即 :Duttonella、Nannomonas、Trypanozoon和Pycnomonas。目前这些亚属的中文译名很不一致 ,且有一些错误。本文就原文名的构词法、词义 ,结合各亚属的沿革和所含虫种 ,特别是其代表种的形态特征 ,对现有的中译名的优劣进行了讨论。并建议将Dut tonella译为达顿锥虫亚属 ,Nannomonas译为短小锥虫亚属 ,Trypanozoon译为小体锥虫亚属 ,Pycnomonas译为短粗锥虫亚属。

通过体外扩增 ,克隆恶性疟原虫海南 (FCC1 HN)株GLURP基因 ,测定其基因序列 ,了解该基因的结构及在FCC1 HN株与其它分离株间的序列差异。根据GLURP基因已知序列设计合成 3对引物 ,用PCR技术从FCC1 HN株基因组DNA中扩增 3个部分序列重叠的GLURP基因片段 ;并分别克隆入测序用PMD 18T载体。用双脱氧链末端终止法测定GLURP基因序列 ,应用软件辅助分析基因结构及进行同源性比较。恶性疟原虫FCC1 HN株GLURP基因全长 3711bp ,编码 12 36个氨基酸。FCC1 HN株与F32株GLURP基因核苷酸序列同源性为 96 2 7% ;编码氨基酸序列同源性为 95 78%。本文为继续进行FCC1 HN株GLURP抗原的免疫原性和保护性研究奠定基础。

为构建弓形虫速殖子期表达的基因的完整长度cDNA文库 ,用CF 11纤维素柱快速提纯速殖子 ,以盐酸异硫氰酸胍 (AGPC)一步法抽提总RNA ,oligo dT纤维素分离mRNA后 ,用ClonTech公司的SmartTMPCRcDNA文库构建试剂盒 ,构建了弓形虫RH株的表达型文库。获得 5× 10 6个独立克隆 ,重组率为 99% ,插入片段的平均长度约为 1kb。根据已知序列设计引物 ,从cDNA文库中扩增出编码棒状体蛋白 1(ROP1)的基因 (不含编码信号肽的序列 ) ,本文库可望用于弓形虫疫苗研究的候选基因的筛选。

目的 :对大链壶菌感染的致倦库蚊幼虫体内重要生化组分变化进行观察 ,以探讨大链壶菌灭蚊的可能机制。方法 :利用组织化学的方法对正常蚊幼与感染不同程度蚊幼体内糖原、蛋白质、核酸 (DNA、RNA)进行显微摄影及定量的图像分析。结果 :潜在感染蚊幼体内即可见糖原反应减弱 ,随着感染加重 ,轻度感染及重度感染蚊幼糖原及蛋白质明显较正常蚊幼减少 ,经图像分析仪进行黑度测定也表明差别具有显著统计学意义。核酸 (尤其是RNA)仅在重度感染组蚊幼脂肪体细胞内有明显减少。结论 :大链壶菌在感染蚊幼尚未见组织学改变时 ,已开始掠夺蚊幼体营养物质 ;随着感染加重 ,蚊幼体大量营养物质 (糖原、蛋白质 )被掠夺 ,可能是其对蚊幼致病的重要原因之一。

目的 :构建白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株 4龄幼虫cDNA文库。方法 :抽提、纯化白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株 4龄幼虫总RNA ,进行反转录合成第 1链cDNA ;用Clontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒进行长距离PCR ,合成全长双链cDNA ;PCR产物经蛋白酶K消化、提纯后 ,进行SfiI酶切 ;用ChromaSpin 40 0柱将酶切产物进行分级分离 ,然后经 1 1%琼脂糖凝胶电泳鉴定 ,回收 40 0bp以上的组分 ,并与λTriplEx2载体连接 ;连接产物经体外蛋白包装 ,产生未扩增文库 ;检测未扩增文库滴度和重组效率后 ,进行文库的扩增 ,并测定扩增文库的滴度 ;随机挑取 9个噬菌体 ,用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增 ,以检测所构建的cDNA文库的质量。结果 :经检测 ,未扩增文库滴度达 2 0× 10 7pfu mL ,重组效率在 10 -4 稀释度时每块平板约 2 10～ 2 5 5个噬菌斑中均未发现任何蓝色噬斑 ,扩增文库滴度达 1 75× 10 9pfu mL ;用载体克隆位点两端的引物进行PCR鉴定 ,结果显示 :所选 9个噬菌体中均含有重组的cDNA ,并且均在 5 0 0bp以上 ,其中 1kb以上的有 2个、 70 0bp的有 5个、 5 0 0bp的有 2个。结论 :已成功地获得一高质量的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株 4龄幼虫cDNA文库。

应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,从吸血 2 4h的致倦库蚊广州株蚊虫总RNA中反转录合成后期胰蛋白酶cDNA第 1链。采用自动DNA分析仪进行序列分析 ,并与其他胰蛋白酶进行同源性比较。结果表明 :致倦库蚊后期胰蛋白酶cDNA部分序列分别长 2 16bp、 2 2 9bp和 2 70bp ,命名为Ctry1、Ctry2和Ctry3。Ctry1和Ctry2均可编码 5 0个氨基酸 (1～ 15 0bp) ,氨基酸组成完全相同。Ctry1、Ctry2与致倦库蚊美国株后期胰蛋白酶前体物氨基酸同源性达 86 %。催化中心位点高度保守 (Ser 5 ) ,具胰蛋白酶特异位点(Gly 2 4,Gly 32 )。而Ctry3可编码 76个氨基酸 (1～ 2 2 8bp)。Ctry3编码的氨基酸与果蝇胰蛋白酶前体物的同源性为 6 8%。催化中心位点高度保守 (Ser 5 ) ,具胰酶特异位点 (Gly 2 4,Gly 32 )。以上表明已克隆出致倦库蚊后期胰蛋白酶cDNA。

白纹伊蚊对高效氯氰菊酯有较快的抗性发展速度 ,抗药性倍数随选育世代的增加呈直线上升 ,经 13代选育 ,抗药性达 2 5 8倍。该蚊对高效氯氰菊酯的抗性不受亲本性别影响 ,是常染色体、多因子遗传。正交和反交的显性度分别为 0 5 0 45和 0 5 2 90 ,表明主要抗药性基因为不完全显性。